分析TAF在血浆和组织中的作用(芬尼醇依维莫司的抗肿瘤机制)

研究了TZM-b1细胞的体外时间依赖性药物吸收/保留。将TZM-b1细胞接种在孔板中。治疗组用10g/mL TAF FTC NP或TAF FTC溶液治疗24小时。对于时间依赖性摄取研究，在相应的时间1、4、8和16小时(处理和冲洗前)用温热的1xPBS洗涤相应的平板，并根据以下说明进行处理。然而，为了保留研究，在治疗24小时后，用温热的1PBS洗去TAF FTC NP或溶液(三次)，并储存在新鲜和完整的hiDMEM中，即补充有10% FBS和1抗生素-抗真菌剂的HiDMEM。直到相应的收获时间(清洗后1、4、8、16、24和96小时，分别对应25、28、32、40、48和120小时)。

在每个时间点，用1PBS再次洗涤细胞。洗涤后，在生物安全柜中风干该板，并将其储存在-80直至分析。样品通过以下液相色谱-串联质谱法进行进一步处理和分析。CD34人性化点头。CG-PRKDCSCIDIL 2RGT M1WJL/SZJ小鼠(hu-CD34-NSG) Jackson实验室将用于PK研究。它与PrEP研究中使用的hu-BLT小鼠非常相似。实验开始前，让老鼠适应一周。此外，ARV NP和ARV溶液处理组的所有小鼠接受皮下注射(SubQ)TAF FTC NP和TAF FTC溶液(TAF和FTC分别为200毫克/千克)。TAF自由贸易委员会NP悬浮在0.6毫升5%葡萄糖。在TAF FTC NP后处理(PT)后1、2、4、7、10和14天的1、4和12小时，通过吸入二氧化碳(n=3/时间点)和颈椎脱位杀死小鼠。同样，接受200毫克/千克TAF FTC溶液SubQ的小鼠在200、8、24、48和72小时(n=3/时间点)被杀死。从所有杀死的小鼠中收集血液和器官，包括阴道和结肠。

将血液收集在配备有收集管的乙二胺四乙酸二钾(K2EDTA)中，以2100 RPM离心20分钟，收集血浆并冷冻，直到其通过LC-MS/MS分析。根据制造商的规定，通过菲科尔-帕克密度梯度分离法从全血中分离外周血单核细胞(PBMC)，并冷冻至液相色谱-质谱/质谱分析。从血浆和组织中分析TFV和FTC，而从PBMC分析活性代谢物。Phoenix WinNonlin用于通过非隔室分析确定血浆和组织浓度-时间数据的药代动力学参数。这些组织浓度-时间数据用于确定特定时间感染部位和相关组织中TFV和FTC的量。

根据我们之前报道的方法，分析血浆和组织中TFV和FTC的浓度。简而言之，将100L血浆或组织匀浆(用钛珠用去离子水[1: 1 W/V]匀浆)与25L内标溶液混合，然后混合100L 1%三氟乙酸。涡旋样品并将其放入固相萃取柱中。洗脱液在氮气流下蒸发至干，用100微升50%乙腈水溶液重构，并将5微升注入液相色谱-质谱/质谱仪器。使用色谱柱进行色谱分离。等度流动相由0.1%甲酸水溶液(A)和0.1%甲酸乙腈组成，流速为0.250毫升/分钟。对于TFV和联邦贸易委员会，验证试验的动态范围为1至2000纳克/毫升。

对于TFV-dp和FTC- TP分析，将500l 70%甲醇水溶液加入到PBMC沉淀物(约106个细胞)中，涡旋、超声和离心。将200微升上清液与50微升内标溶液(1微克/毫升2-氯腺苷三磷酸和250纳克/毫升TFVTFV腺嘌呤13C)混合，在45蒸发至干，并用100微升甲酸铵重构。将5L含有0.05%体积比三乙胺的样品注入以阴性模式运行的液相色谱-串联质谱法中。使用具有等度流动相的Kinetex C18(754.6 mm，2.6)柱，其包含2mM甲酸铵0.05%三乙胺：ACN(955)，流速为0.25 mLmin。两种分析物的动态校准范围为1至1000纳克。

为了在体外测量细胞内TFV、FTC、TFV-dp和FTC-tp，加入0.5% EDTA(溶于60L水中)并涡旋，以从孔板中分离细胞。向分离的细胞中加入140微升甲醇以溶解细胞。涡旋孔板，并在4下以14000转/分钟的速度离心5分钟。那么taf现在在哪里可以买到呢？价格是多少？更多详情请咨询下方微信。

芬尼醇/依维莫司的抗肿瘤机制

MTOR是肿瘤细胞生长和代谢的重要枢纽。mTOR抑制剂依维莫司(fenitol)通过抑制生长因子信号转导通路下游，直接作用于肿瘤细胞和肿瘤血管，使耐药患者获益。肾细胞癌是一种高血管生成的肿瘤。肿瘤细胞产生的VEGF导致大量的肿瘤血管。VEGF拮抗剂可抑制肿瘤血管内皮细胞。如果VEGF拮抗剂失效，肿瘤将继续生长。

MTOR可以同时抑制肿瘤VEGF生成、细胞生长、营养和代谢，抑制血管内皮中的mTOR抑制血管细胞的生长和生成，从而治疗肾癌。抑制mTOR通路正日益成为恶性肿瘤的重要治疗策略。研究表明，在血管内皮细胞中，VEGFR信号通路的改变导致mTOR通路的改变。依维莫司通过抑制HIF-的生成，降低血清和肿瘤VEGF水平，从而抑制肿瘤血管及肿瘤血管平滑肌细胞的生长。

因此，依维莫司作为一种全新的抗血管治疗药物，具有潜在的治疗价值。除了抑制肿瘤细胞的增殖和影响肿瘤相关的血管生成外，依维莫司还可以通过多种途径影响肿瘤细胞的生长。依维莫司作用后，不仅抑制肿瘤细胞，而且通过抗血管生成控制能量代谢物质和生长信号，使肿瘤细胞得到自然控制，从而发挥抗肿瘤作用。