乳腺癌替尼PC-9细胞增殖抑制DNA损伤的新方法

易瑞沙/吉非替尼是一种口服活性抗肿瘤药物，通过阻断表皮生长因子受体 (EGFR) 信号通路来抑制不受控制的细胞增殖。各种体外和体内研究表明，乳腺癌易感基因 1 ( ) 的上调与化疗耐药和化疗后生存率降低有关。本研究采用吉非替尼-高敏细胞系PC-9研究表达对PC-9细胞对吉非替尼敏感性的影响。 PC-9 细胞被 BRCA-1 (HA-) 稳定转染。用吉非替尼处理转染和未转染的 PC-9 细胞，并通过蛋白质印迹检查磷酸化的 γH2AX 以确定 DNA 损伤。吉非替尼治疗后，PC-9 细胞增殖受到抑制，PC-9-。测定了1细胞和转染的PC-9细胞。此外，还进行了彗星试验以确定吉非替尼引起的 DNA 损伤。吉夫替尼治疗在 6 小时、12 小时和 24 小时显着增加了磷酸化 γH2AX 的细胞表达。在吉非替尼治疗下，过表达 BRCA-1 的 PC-9 细胞对增殖的抑制作用明显低于未转染的 PC-9 细胞，这表明过表达在减弱 PC-9 对吉非替尼的敏感性细胞中起作用。彗星试验表明转染细胞显示出较短的彗尾，表明过表达减弱了吉非替尼诱导的 DNA 损伤。 α-β的过表达减少了DNA损伤并增强了DNA修复机制。

据报道，肺癌是癌症相关死亡的主要原因，2012 年有 159 万人死亡。作为肺癌的一种，占所有肺癌病例的 80% 以上，预后不良，生存不佳。已在各种癌症类型中检测到 EGFR 的激活和过表达，并已被建议促进肿瘤发生、癌症进展和转移。因此，EGFR是癌症治疗的重要靶点之一，包括阻断EGFR活化的小分子TKI易瑞沙/吉非替尼。研究表明，吉非替尼治疗可降低参与 DNA 合成和 DNA 修复的 α-β、pAKT 和 pERK 水平。由 EGFR 介导的 DNA 修复机制已被证明需要与 DNA 蛋白激酶 (DNA-PKcs) 的催化亚基结合，后者与 EGFR 形成复合物以调节非同源末端连接以修复 DNA 链断裂。吉非替尼治疗抑制 EGFR 活化并阻断 DNA-PKcs 与 EGFR 之间的相互作用。

pγH2AX 的存在表明 DNA 损伤，包括双链断裂和单链损伤。 DNA损伤可由外源性因素（如辐射）或内源性因素（如致癌突变和正常的DNA复制）引起。对 A549 和细胞的研究表明，抗癌药物易瑞沙/吉非替尼治疗会干扰 DNA 修复机制，从而延长 DSB 的存在，从而诱导 pγH2AX 的积累。我们的研究还表明，响应吉非替尼，PC-9 细胞中 pγH2AX 的细胞水平增加。尽管我们研究中的 PC-9 细胞没有暴露于辐射以产生 DNA 损伤，但我们模型中 DNA 损伤的主要来源是正常的 DNA 复制。积累的 pγH2AX 对于募集参与 DNA 修复的各种复合物至关重要，包括 .

作为DNA修复的重要机制，同源重组（HR）需要通过调节转录和激活细胞周期检查点来修复DNA损伤。 DNA 修复中的重要作用涉及与各种细胞蛋白的相互作用，例如 PALB 和 .在我们的研究中，我们检测到因易瑞沙/吉非替尼引起的 DNA 损伤而增加的细胞水平。检测到核病灶的共定位和在核病灶中。不是 和 之间的直接相互作用，而是招募 ，这有助于加载到 DNA 损伤位点。在这个复合体中，它在识别 DSB 位点中发挥作用，因为已显示敲除可减少 DNA 链上的病灶形成。该复合体的一个重要域是 的盘绕线圈域。卷曲螺旋结构域中的错义突变已被证明会破坏和之间的相互作用，从而降低 HR 功效。一旦确定了 DNA 损伤位点，就会招募直接促进 DNA 修复的蛋白质。 Hela 细胞的耗竭揭示了较低的核水平，这表明除了 α 的参与之外，它是促进进入细胞核的另一种重要蛋白质。因此，在本研究中，随着对吉非替尼的早期反应，过度表达显着增加。然而，在过表达 PC-9 细胞中，细胞水平在吉非替尼治疗 12 小时后开始下降。这可能是由于那些促进进入细胞核的蛋白质的活性降低，导致 DNA 修复减少。这也解释了吉非替尼处理 12 小时后 pγH2AX 的增加和吉非替尼处理 24 小时后过度表达 PC-9 细胞的细胞生长抑制增加。虽然介导抗 DNA 链入侵的活性，但也可以与其他蛋白质相互作用，包括 S 期检查点和泛素化染色质靶向，这些蛋白质也具有调节细胞增殖的作用。

已在各种癌症类型中研究了 DNA 修复和细胞周期调节中的作用。在来自乳腺癌和卵巢癌的细胞系中，β-α的敲低促进了恶性细胞的生长，而将α-β引入细胞中则抑制了肿瘤细胞的增殖。这些结果表明在乳腺癌和卵巢癌中具有生长抑制活性。然而，相反的效果显示在 中。在我们的研究中，过表达减弱易瑞沙/吉非替尼诱导的细胞生长抑制，尽管细胞生长抑制随着吉非替尼暴露的延长而增加。

据报道，44% 的 mRNA 和蛋白质表达降低。此外，在缺陷亚组中进行的一项研究揭示了通过靶向多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制的进展来有效治疗奥拉帕尼。奥拉帕尼的一项 IB 期研究指出，EGFR 突变高表达水平的患者在接受吉非替尼等 TKI 治疗时，无进展生存期较短。这表明 β 的过表达降低了 TKI 治疗的有效性，这与我们的研究结果一致。我们的研究表明，过表达 ，显着减少 DNA 损伤并减弱吉非替尼诱导的细胞生长抑制。

在 PC-9 细胞系中评估了易瑞沙/吉非替尼对细胞生长抑制和 DNA 损伤的影响。吉非替尼治疗诱导的 DNA 损伤以及细胞生长抑制因 α 的过表达而显着减弱，尽管减弱不会延长超过 24 小时。我们的研究结果揭示了抗癌 TKI 药物在细胞存活中的重要作用。因此，我们认为可以作为药物开发的靶点。微信扫描下方二维码了解详情：

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