【香樟推文】肺癌的主要治疗手段与目的

【摘要】 背景与目的：肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在世界各国均呈上升趋势。对人类健康的威胁。目前肺癌的主要治疗方法仍是手术、化疗和放疗，总体疗效并不理想。特别是对于一些晚期肺癌患者，由于失去手术机会，往往需要大剂量化疗以延长生存期。吉非替尼作为一种新型分子靶向治疗药物，可抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶的活性。它延长了患者的生存时间，提高了患者的生活质量，但几乎所有服用该药的患者最终都会产生耐药性，从而限制了其长期疗效。目前的研究表明，吉非替尼耐药的产生可能是多种机制共同作用的结果，一些研究表明，吉非替尼的调控可能参与了吉非替尼在肿瘤获得性耐药的过程中。它是一类非编码内源性小RNA分子，通常由20-22个核苷酸组成，广泛存在于各种生物体中，在转录后水平负调控基因表达。研究相继发现，参与人体的各种生命活动，可以促进细胞增殖，调节细胞凋亡通路，参与细胞周期的调节，参与人体的代谢过程。肿瘤的发生与异常的细胞增殖、分化和凋亡密切相关。通过这些癌症相关通路发现了一些肿瘤相关通路，如：miR-126、miR-14等。

在耐药基因调控的相关研究中发现，miR-27a和miR-451与P-糖蛋白的表达和MDR1基因产物的激活有关，可能导致耐药基因的产生。肿瘤细胞。它还涉及对吉非替尼的获得性耐药的发展。有研究发现mir-128b可以靶向EGFR，在很多非小细胞肺癌肿瘤样本中都可以检测到mir-128b杂合性缺失，而mir-128b杂合性缺失与吉非替尼给药后的杂合性。临床结果与生存率之间存在显着相关性。肺癌细胞中let-7a和miR-126、miR-45的过表达可以控制AKT和ERK的活性，增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。肺癌细胞的耐药指数增加了6倍。目前，国内外关于吉非替尼在肿瘤获得性耐药机制中作用的研究很少。因此，尚需进一步研究吉非替尼在肺癌获得性耐药机制中的作用。选择个体化方案以避免和克服对吉非替尼的获得性耐药具有重要意义。肺癌对吉非替尼的耐药性是临床常见问题，一直困扰着肺癌的治疗。本研究旨在通过对吉非替尼敏感和耐药人肺腺癌细胞株耐药差异的分析和鉴定，建立吉非替尼敏感和耐药人肺腺癌细胞株。人肺腺癌细胞的表达谱与人肺腺癌细胞对吉非替尼的耐药性密切相关。 .

方法：本研究从PC9细胞中通过MNNG诱变筛选出高敏感性PC9细胞和三种不同吉非替尼IC50的耐药细胞株PC9/AB。2、PC9/AB11、PC9 /BB4为研究对象，倒置显微镜观察四种细胞株的形态学差异，采用细胞计数法绘制细胞生长曲线并计算细胞倍增时间，四种细胞株的周期分布为流式细胞仪检测，MTT法。检测吉非替尼对四种细胞系的IC50，鉴定敏感PC9细胞与三种耐药细胞的生物学特性和耐药性差异，以及三种耐药细胞的生物学特性和差异等方法细胞。在此基础上，进一步应用表达谱芯片技术筛选鉴定人肺腺癌细胞中与吉非替尼耐药相关的差异表达谱。构建吉非替尼获得性耐药相关的表达载体和对照载体，转染耐药细胞株，筛选与获得性耐药机制相关的细胞株。结果：1.抗性细胞系PC9/AB2、PC9/AB11、PC9/BB4与敏感细胞系PC9相比，PC9/BB4细胞形态变化更明显，细胞体细长;与敏感株PC9细胞相比，PC9/AB11在G0/G1期的分布明显高于PC9（P=0.009), PC9/AB2、@ >PC9/BB4在G0/G1期的分布明显低于PC9细胞（P均0)；PC9/AB11细胞在G2/M期的分布与PC9细胞无显着差异, G2/M期PC9/BB4细胞分布明显低于PC9细胞(P=0.031), G2/M期PC9/AB11细胞明显低于PC9细胞(P=0);PC9/AB11细胞在S期的分布明显低于PC9细胞(P=0.003),PC9/ S期BB4细胞显着高于PC9细胞（P=0), PC9/AB11 S中细胞的分布显着高于PC9细胞（P=0);细胞倍增时间明显延长； 2.MTT法检测细胞的IC50，敏感PC9细胞的IC50为(0.022±0.01)μmol/L，药物的IC50/AB11-耐药PC9细胞为(2.07±0.11)μmol/ L、PC9/BB4细胞的IC50为(0.973±0.17< @6)μmol/L，PC9/AB2细胞的IC50为(12.383±1.352)μmol/L，三个耐药细胞系之间存在显着差异和敏感细胞系（P0.05).

3.与对照PC9细胞相比，耐药细胞株的表达谱显示PC9/AB2细胞中19个上调，11个下调； PC9/AB11细胞中4个上调，9个下调；在 PC9/BB4 细胞中，18 个上调，7 个下调。 4.构建miR-503.1(+)/-mir-503的表达质粒，转染PC9/AB11细胞和PC9/AB2细胞。与转染1(+)/对照组相比，转染 A3.1(+)/-mir-503后，耐药细胞的IC50显着降低，具有统计学意义。 5.构建miR-100表达质粒 A3.1(+)/-mir-100，转染PC9/AB11细胞、PC9/AB2细胞，转染1(+)与对照组转染0.1(+)/-mir-100后耐药细胞IC50无明显变化，无统计学意义。 6.构建miR-138.1(+)/-mir-138的表达质粒，转染PC9/AB2细胞。与转染1(+)/对照组相比，转染1(+)/-mir-138对耐药细胞的IC50无明显变化，无统计学意义。转染PC9/AB11细胞，与转染1(+)/对照组相比，转染1(+)/- mir-138后耐药细胞的IC50发生显着变化，具有统计学意义。

7.将miR-21-miR-21抑制剂转染PC9/BB4细胞，与转染--miR-21相比，两种细胞的IC50无显着差异。结论：吉非替尼敏感性人肺癌细胞株及其衍生的吉非替尼获得性耐药细胞株具有不同的吉非替尼IC50，且吉非替尼耐药细胞的吉非替尼IC50显着升高。获得性耐药细胞系和吉非替尼敏感细胞系的表达谱显着不同。 (?) niR-503和miR-138在获得性耐药细胞系中的低表达可能与吉非替尼的获得性耐药有关。